PG电子推出的这款荧光定量PCR检测试剂盒，是基于探针法原理开发而成，具有以下几个显著特点：

产品特点

1. 即用即开：用户只需提供样品DNA模板即可便捷使用。

2. 高灵敏度：经过优化的引物和相关组分，确保产品灵敏度显著提升。

3. 阳性对照提供：本产品附带阳性对照，方便用户有效区分假阴性样品。

4. 高特异性：引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区，避免与其他生物样本的DNA发生交叉反应。

5. 定性与定量检测：本试剂盒支持定性和定量检测，定量检测的线性范围至少覆盖5个数量级。

6. 充足的反应次数：本产品足以支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。

7. 科研专用：该产品仅限于科研使用。

操作方法

一、DNA提取

在样本制备区，用户可选择任意方法提取和纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品

（因阳性对照浓度较高，相关稀释操作应在独立区域内进行以避免污染）：

1. 标记6个离心管，分别编号为7、6、5、4、3、2。
2. 在每个管中加入45μL DEPC-H2O，建议使用带芯枪头。
3. 在7号管中加入5μL 1×10⁸拷贝/μL的阳性对照，震荡1分钟，得到1×10⁷拷贝/μL的标准样品，放冰待用。
4. 用新枪头在6号管中加入5μL 1×10⁷拷贝/μL的阳性对照，震荡1分钟，得到1×10⁶拷贝/μL的标准样品，放冰待用。
5. 在5号管中加入5μL 1×10⁶拷贝/μL的阳性对照，震荡1分钟，得到1×10⁵拷贝/μL的标准样品，放冰待用。
6. 重复上述步骤，直至获得6个不同稀释度的标准样品。若不需要制作标准曲线，将阳性对照直接稀释至1×10⁵拷贝/μL。

三、试剂配制

在试剂准备区，若待检样品数量为N，则需准备N+2个qPCR管（包括N个待测样品、1个阴性对照及6个阳性对照），向各PCR管中加入相应成分（详细配制说明可向PG电子索取）。

四、添加模板

在模板添加区，向各qPCR管中加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应

将PCR管置于PCR扩增仪的指定位置，按照扩增程序进行反应（具体操作步骤可向PG电子索取）。

六、结果分析

1. 若制作标准曲线，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴绘制曲线，通过待测样品的Ct值推算其DNA浓度的log值。

2. 若未制作标准曲线，则根据以下标准判定结果：

• 阳性对照：Ct值<30，呈现明显指数增长及典型S型曲线。
• 阴性对照：Ct值38或无Ct值，无明显增长期和平台期。
• 样本检测：Ct值<35，表明样本中检测到目标，结果为阳性；Ct值38或无Ct值则为阴性。如果Ct值在35-38范围，应进行复检，若结果仍在此范围且有明显增长，则判定为阳性，否则为阴性。

运输与保存

本产品需低温运输，保存于-20℃环境下，保质期为一年。阳性对照应单独存放，避免污染其他试剂。